蛋白印跡轉(zhuǎn)移膜的選擇
蛋白印跡轉(zhuǎn)移（Western Blot）實(shí)驗(yàn)中常用的轉(zhuǎn)移膜主要是硝酸纖維素膜（Nitrocellulose Blotting Membranes,NC）和PVDF膜，此外也有用尼龍膜、DEAE纖維素膜。
1、硝酸纖維素膜與PVDF膜特點(diǎn)介紹：
1）硝酸纖維素膜（NC膜）是蛋白印跡實(shí)驗(yàn)中使用最廣泛的轉(zhuǎn)移介質(zhì)，對(duì)蛋白有很強(qiáng)的結(jié)合能力，且適用于各種顯色方法。NC膜使用簡(jiǎn)便，無(wú)需甲醛預(yù)處理，只要在無(wú)離子水面浸潤(rùn)排出膜內(nèi)氣泡，電泳緩沖液中平衡幾分鐘即可。NC膜容易封閉，無(wú)需特別嚴(yán)謹(jǐn)?shù)那逑礂l件，轉(zhuǎn)移到NC膜上的蛋白在合適的條件下可以穩(wěn)定保存很長(zhǎng)時(shí)間。
NC膜越純，其蛋白結(jié)合能力就越高。但純的NC膜比較脆，容易卷，不適合用于需要多次重復(fù)清洗的實(shí)驗(yàn)。另外由于NC膜上結(jié)合的蛋白會(huì)因一些去污劑而被代替，在封閉時(shí)最好使用較溫和的Tween20，濃度不超過(guò)0.3%。
2）PVDF膜
與硝酸纖維素膜相比，PVDF膜在蛋白質(zhì)截留能力、機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)相容性上都擁有更優(yōu)越的性能。做N端蛋白測(cè)序時(shí)，在相當(dāng)“嚴(yán)酷”的清洗條件下，當(dāng)尼龍或硝纖膜已經(jīng)降解的情況下，PVDF膜依然保持本色。PVDF膜不適合熒光，同時(shí)PVDF膜需要100%甲醇預(yù)處理再用緩沖液平衡才能使用。
2、膜選擇依據(jù)：
1）膜與目的蛋白分子的結(jié)合能力（單位面積的膜能結(jié)合蛋白的載量）以及膜的孔徑（攔截蛋白的大?。?；
2）保證不影響后續(xù)的顯色檢測(cè)（即適用于所選的顯色方法，信噪比要好）；
3）如果后繼實(shí)驗(yàn)有其他要求，根據(jù)不同目的來(lái)挑選不同的轉(zhuǎn)移膜。
3、兩種膜的參數(shù)對(duì)比：
|
參數(shù)項(xiàng)
|
硝酸纖維素膜（NC）膜
|
PVDF膜
|
|
材料質(zhì)地
|
干的NC膜易脆
|
機(jī)械強(qiáng)度高
|
|
結(jié)合能力
|
80-110 ug/cm2
|
125-200 ug/cm2
|
|
背景
|
低
|
低
|
|
溶劑耐受性
|
無(wú)
|
有
|
|
操作程序
|
緩沖液潤(rùn)濕，避免氣泡
|
使用前100%甲醇潤(rùn)濕
|
|
檢測(cè)方式
|
常規(guī)染色，可用放射性和非放射性檢測(cè)
|
常規(guī)染色，可用考馬斯亮藍(lán)染色，可用于ECL檢測(cè)、質(zhì)譜分析和快速免疫檢測(cè)
|
|
適用范圍
|
大于20 KD的大分子蛋白選用0.45 um孔徑膜；小于20 KD選用0.2 um孔徑膜；小于7 KD選用0.1 um孔徑膜
|
分為0.45 um和0.2 um孔徑，孔徑小的對(duì)小分子蛋白有較好的攔截吸附。主要用于核酸、糖蛋白及蛋白質(zhì)測(cè)序
|
|
價(jià)格
|
價(jià)格較便宜
|
較貴
|
百靈威可提供一系列質(zhì)量極佳的硝酸纖維素膜和PVDF膜，歡迎致電400-666-7788垂詢(xún)！
|