細胞內(nèi)外pH的變化在生理和病理過程中扮演著很重要角色，細胞內(nèi)pH的變化會容易誘導細胞分裂、快速生長和功能的失調(diào)。細胞外pH變小呈酸性是癌變以及其它病變的一個重要信號。對細胞內(nèi)外不同區(qū)域pH的檢測有助于對細胞生命過程以及病理機制的研究。
ANNA是一個理想的比率型pH熒光探針:
l 靈敏度高：ANNA的吸收和發(fā)射光譜在生理pH范圍內(nèi)（pH 6-8），并且在酸性和堿性狀態(tài)下都有很高的熒光量子產(chǎn)率；
l 反應(yīng)性好：ANNA的羧基可以偶聯(lián)其它各種生物分子、藥物分子或微納材料，而其pH響應(yīng)功能不受影響。因為，ANNA的pH響應(yīng)是來自于4H-1,2,4-三氮唑(1,5-a)二氮雜環(huán)-1,8-萘酰亞胺結(jié)構(gòu)，且熒光信號不隨酰亞胺N-取代基的改變而改變；
l 產(chǎn)品穩(wěn)定：對pH響應(yīng)具有良好的可逆性，可以長時間反復使用，對光、空氣等非常穩(wěn)定；
l 抗干擾能力強，適用范圍廣：離子強度對熒光團不產(chǎn)生干擾，可用于細胞、動物復雜生物體系。[1-3]
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產(chǎn)品編號
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產(chǎn)品名稱
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簡稱
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CAS
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結(jié)構(gòu)式
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2668726
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N-己酸基-4H-1,2,4-三氮唑(1,5-a)二氮雜環(huán)-1,8-萘酰亞胺
3,9-Dihydro-1,3-dioxopyrido[3,4,5-gh][1,2,4]triazolo[1,5-a]perimidine-2(1h)-hexanoic acid
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ANNA
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1359819-97-8
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n 產(chǎn)品使用說明
1）細胞在成像的前置于直徑為20mm的玻璃基底細胞培養(yǎng)皿（MatTek Co.）培養(yǎng)24h。
2）將pH探針ANNA（4 mM）與細胞在細胞培養(yǎng)基中孵育1-2h。
3）用PBS緩沖液（pH=7.4）洗細胞三次，去除游離的探針。
4）細胞成像用100倍共聚焦顯微鏡觀察。激發(fā)波長是405nm和488nm，熒光信號收集1通道425-475 nm和2通道500-600 nm的熒光強度。（如配有455nm激光器：可直接用455nm激發(fā)，收集1通道（470nm-500nm）和2通道（505nm-540nm）熒光強度）
5）pH標準曲線：用1mL含5 ug /mL nigericin（一種運載鉀離子和氫離子的載體，能夠使細胞內(nèi)外的pH快速的達到一致）的不同pH的高K+ HEPES緩沖液處理細胞10min。 高K+ HEPES緩沖液含有125 mM KCl, 20 mM NaCl, 0.5 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2, 5 mM 葡萄糖和20 mM HEPES。然后進行細胞成像， 根據(jù)I2通道/I1通道與pH的關(guān)系繪制曲線，將待測樣品比值帶入標準曲線，獲得實際細胞內(nèi)外的pH。
n 更多熒光探針產(chǎn)品
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產(chǎn)品編號
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產(chǎn)品名稱
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CAS
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結(jié)構(gòu)式
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2668725
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2,6-雙（2-（3,3-二甲基-1-丙基-二氫吲哚-2-亞基）亞乙基）-環(huán)己酮
2,6-Bi(2-(3,3-dimethyl-1-propylindolin-2-ylidene)ethylidene)-cyclohexanone
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1442645-34-2
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.bmp)
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2668724
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2,9-雙[4-（4-甲基哌嗪-1-基）苯乙烯基]-1,10-菲咯啉
2,9-Bis[4-(4-methylpi-perazin-1-yl)styryl]-1,10-phenanthroline
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1792998-33-4
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.bmp)
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2668727
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CSTS
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N/A
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.bmp)
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433521
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D-熒光素鉀鹽
D-Luciferin potassium salt
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115144-35-9
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.bmp)
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102273
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2,3-二氨基萘
2,3-Diaminonaphthalene
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771-97-1
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.bmp)
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2668723
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9-甲基-3,6-雙[5-（4-甲基哌嗪-1-基）-1H-苯并[d]咪唑-2-基] -9H-咔唑
9-Methyl-3,6-bis[5-(4-methylpiperazin-1-yl)-1H-benzo[d]imidazol-2-yl]-9H-carbazole
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1514901-89-3
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.bmp)
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227585
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鄰苯二甲醛
o-Phthalaldehyde
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643-79-8
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.bmp)
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n 相關(guān)文獻
[1] Zhou, J., Fang, C.L., Chang, T.J., Liu, X.J. and Shangguan, D. A pH sensitive ratiometric fluorophore and its application for monitoring the intracellular and extracellular pHs simultaneously. J Mater Chem B, 1, 661-667 (2013).
[2] Hou, Y., Zhou, J., Gao, Z., Sun, X., Liu, C., Shangguan, D., Yang, W. and Gao, M. Protease-activated ratiometric fluorescent probe for pH mapping of malignant tumors. ACS nano, 9, 3199-3205 (2015).
[3] Ma, T., Hou, Y., Zeng, J., Liu, C., Zhang, P., Jing, L., Shangguan, D. and Gao, M. Dual-Ratiometric Target-Triggered Fluorescent Probe for Simultaneous Quantitative Visualization of Tumor Microenvironment Protease Activity and pH in Vivo. J Am Chem Soc (2017).
n 相關(guān)產(chǎn)品